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    拒絕污染與變性!離心機分離要點總結

      從相關文獻資料了解到離心機的離心分離方法還是以它的分離范圍廣,容量等優勢存在著;可以研究天然生物大分子的流體動力學特性;可以在電離介質中進行生物大分子的片段分離;對緩沖劑限制很。ㄔ陔娪炯夹g中由于電流的熱效應而限制了緩沖劑的使用)等等。另外在各種實驗方法的前處理階段,離心法還是被廣泛的使用著?紤]到各個研究部門的設備分布情況,在很多條件下,離心分離的使用還具有相當的廣泛性。作為有效的分離純化方法,差分離心、速率區帶密度梯度離心和等密度離心在生物大分子的研究中還占有重要地位。

      離心機分離要點:

      1) 防止污染:

      要避免在實驗過程中由于生物大分子部分受損而引起降解或變性,引起降解的原因很多,如實驗過程中的外力作用;某些酶污染等等,但最常見的原因是酶的作用。

      實驗過程中由于污染某些脫氫酶進入樣品而使生物大分子變性。

     。2) 避免變性的其他注意事項:

     。╥)轉頭在離心前預冷到接近離心溫度(在冰箱中放置過夜,或在恒溫箱中保溫)。對于超速離心機,其制冷系統主要用于抵消轉頭在稀薄空氣中高速運轉(轉頭表面線速度從亞因速—>超因速)時氣動力摩擦產生的熱量。在真空中,只有輻射傳熱的情況下,高速運轉的轉頭溫度從室溫(如夏天30~35℃)降到5℃時間很長(如1 小時左右)一般應預冷到接近離心溫度(±2℃)以確保在離心的最初階段(15 分鐘以內)轉頭溫度和樣品溫度一致。

     。╥i)用固定角式或近垂直管轉頭或垂直管轉頭作梯度離心時必須利用離心機的慢加速(0~500rpm )、慢減速(500rpm~0)功能,以保證梯度方向的順利轉換。

     。╥ii)離心開始、離心結束都要小心地輕放和輕取離心管,避免大的震動。

     。╥v)卸樣過程應在無震動的實驗臺上進行,環境溫度和離心溫度相近,卸樣方法應選擇平穩、外力作用很小的方式,盡可能不用泵輸送樣品。

      3) 梯度離心也有其相關要點,這一塊內容相對復雜,要參考很多文獻資料,感興趣得朋友可以自行去了解一下:

     。1)B.D.Hames "Choice of Conditions for Density Gradient Centrifugation"IRL press.oxford 1984

     。2)M.Dobrota,R.Hinton "Conditions for density gradient Separations" Oxford University press .1992

     

     。3)D.RickWood,B.D.hames "Centrifugation,Essential Data" Wiley press.1994

     

     。4)C.A.Price "Centrifngation in density gradients"Academic press.New York 1982

     

     。5)余興明,"質粒DNA的超速離心分離""生命的化學"1994.1

     

     。6)余興明"血清脂蛋白的離心分離""生命的化學"1997.3

     

     。7)余興明"離心技術"設備與方法概論上海生物物理學會1986,1993年)。

     

    以上就是關于離心機得簡單解說,離心機雖然只是一款小型分離設備,但是它得作用,價值,是很大得,所以要多了解離心機才能多發掘它得作用與價值!


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